显微镜分辨率计算时的波长问题

sunsakery

想请教下各位大佬，在显微镜分辨率计算公式：0.61λ/NA中，λ波长我们通常选择0.55μm。倘若使用白光LED进行落射照明，此时按照λ=0.55μm计算就与实际对不上了。白光LED光谱有两个峰值，主峰值在0.45μm或0.465μm，另一个峰值在0.53μm左右。计算分辨率的这个波长是该选择主峰值波长，还是要计算一个平均波长，多峰值光谱平均波长该如何计算呢？

Ds12345679

用Zemax设计时可见光常用Fdc三条谱线代替，波长0.5876μm是主波长，Fc光用来计算色差。书本上用波长0.55μm主要是考虑用眼镜看显微镜的成像，然后推导出最小分辨率。

zenghui

你这个如果是用于荧光显微镜的话，分辨率计算应该要看激发荧光的波长吧。如果是label free的显微镜，我个人感觉可以按波长的响应率，算个加权平均分辨率。

sunsakery

zenghui 发表于 2022-6-4 10:03
你这个如果是用于荧光显微镜的话，分辨率计算应该要看激发荧光的波长吧。如果是label free的显微镜，我个人 ...

我的是用在金相显微镜中，是使用工业相机进行探测，若这样是否就需要将LED峰值在COMS的响应率进行加权平均来计算其波长

zenghui

sunsakery 发表于 2022-6-5 21:02
我的是用在金相显微镜中，是使用工业相机进行探测，若这样是否就需要将LED峰值在COMS的响应率进行加权平 ...

金相显微镜拍的是材料的反射图像是吧。要精确计算分辨率是不是 还得知道这个材料光谱反射率，因为最后为图像做贡献的光谱分布=LED发射光谱*反射率谱*CMOS响应谱。假设反射率都为1，光源发射谱线中，峰值波长含量远高于其它波长，就可以用你说的方法进行近似计算。说实话这个感觉也算不太准，不如就拿峰值波长算算，只要实际分辨率与之差距不大，我觉得就OK。我是做荧光显微镜的，以上纯属自己推测。